當我們討論疫苗的時(shí)候，我們能討論什么？

2017-12-23 來(lái)源：轉化醫學(xué)網(wǎng) 標簽：掌上醫生喝茶減肥一天瘦一斤安全減肥 cps聯(lián)盟美容護膚

摘要：結果顯示該方法可檢測并量化糖基化。且采用該方法可同時(shí)鑒定糖基化位點(diǎn)和聚糖分子。這一成果幫助疫苗研究者克服了傳統檢測手段能力不足帶來(lái)的困難。

　　引言

　　隨著(zhù)“山東疫苗案”的曝光，這場(chǎng)由于疫苗管理、存儲、運輸等環(huán)節出現問(wèn)題造成的疫苗安全危機再一次引爆了疫苗安全話(huà)題的討論，世界衛生組織也就此事件發(fā)表了相關(guān)聲明。究竟此次疫苗事件可能對大眾健康造成怎樣的影響呢？在從疫苗研發(fā)、生產(chǎn)、儲存、運輸到最終使用的整條產(chǎn)業(yè)鏈中，又是如何進(jìn)行疫苗檢測的呢？而隨著(zhù)遺傳學(xué)的飛速發(fā)展，疫苗未來(lái)的發(fā)展趨勢又將何去何從？

　　疫苗，大眾健康的忠誠衛士

　　人類(lèi)的發(fā)展史，就是一部與病原微生物的斗爭史，而其中疫苗的誕生意義重大——利用疫苗，人類(lèi)消滅了曾經(jīng)被譽(yù)為死神的天花；兒童再也不用為脊髓灰質(zhì)炎、麻疹、百日咳等疾病擔驚受怕；即使是致死率接近100%的狂犬病也能夠通過(guò)及時(shí)注射疫苗來(lái)杜絕……可以說(shuō)，隨著(zhù)現代生物制藥技術(shù)的發(fā)展，疫苗已經(jīng)為大眾健康筑起了一道堅實(shí)的防線(xiàn)。

　　然而，正如其他藥品一樣，疫苗產(chǎn)品也需要一套經(jīng)過(guò)科學(xué)驗證的研發(fā)、生產(chǎn)、儲存、運輸、使用流程，任何環(huán)節的疏漏都會(huì )為疫苗產(chǎn)品引入安全隱患，甚至造成嚴重的安全事故。以此次“山東疫苗案”為例，據當前最新調查結果，此次涉事疫苗均為自愿自費注射的二級疫苗，因儲存不當（未冷藏）、管理不善、產(chǎn)品過(guò)期等問(wèn)題，造成部分疫苗失效。而世界衛生組織也發(fā)布公告稱(chēng)，此次涉事的失效疫苗，雖然不會(huì )直接產(chǎn)生對接種者有害的毒性，但會(huì )失去正常的效果，降低接種者針對特定疾病的免疫效果。

　　疫苗檢測，生物制藥的攻關(guān)難題

　　正是由于疫苗之于大眾健康的意義，確保疫苗產(chǎn)品質(zhì)量、功效與安全至關(guān)重要。對于疫苗產(chǎn)品而言，生產(chǎn)原料、生產(chǎn)過(guò)程不同階段的產(chǎn)物以及最終產(chǎn)品的質(zhì)量控制的關(guān)鍵是嚴格的檢驗以及準確高效的檢驗方法。然而，疫苗往往來(lái)源于活體生物材料，生產(chǎn)原料、生產(chǎn)過(guò)程以及最終疫苗產(chǎn)品的復雜性和內在變異往往會(huì )帶來(lái)眾多困擾生物制藥產(chǎn)業(yè)的特殊問(wèn)題。

　　隨著(zhù)現代分子技術(shù)和相關(guān)方法的發(fā)展，這些全新的技術(shù)成果為疫苗質(zhì)量控制提供了全新的檢驗方法，其中基于質(zhì)譜分析技術(shù)（MS）的檢測方法受到了廣泛的應用。例如在研究疫苗特征方面，質(zhì)譜分析技術(shù)被廣泛應用于疫苗的整個(gè)產(chǎn)業(yè)鏈，覆蓋疫苗發(fā)現、開(kāi)發(fā)、劑型配制、生產(chǎn)、穩定性試驗、質(zhì)量控制、上市審批簽發(fā)、上市后檢測等環(huán)節，其中高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用（HPLC-MS）以及電噴霧-串聯(lián)四極桿飛行時(shí)間質(zhì)譜聯(lián)用（ESI-Q-ToF-MS）等技術(shù)被廣泛應用于描述疫苗特征。

　　在這些技術(shù)中，高分辨力質(zhì)譜儀，如電噴霧-串聯(lián)四極桿飛行時(shí)間質(zhì)譜（Q-ToF），作為一種全新技術(shù)，已經(jīng)推動(dòng)疫苗特征描述進(jìn)入了一個(gè)新的階段。目前這些技術(shù)能夠檢測免疫原蛋白質(zhì)和核酸的較小的改變。而隨著(zhù)新分析技術(shù)的進(jìn)展，尤其是高分辨力、高精確度質(zhì)譜方法和新的蛋白質(zhì)NMR的進(jìn)展，傳統的技術(shù)如凝膠電泳和親和色譜也正在被加強。這一系列技術(shù)為曾經(jīng)難以實(shí)現的疫苗組分結構改變檢測提供了方法。

　　同時(shí)，應用高分辨力質(zhì)譜技術(shù)能夠比較好地描述導致疫苗物理特征改變的免疫原性蛋白質(zhì)或核酸改變的特征。Q-TOF可以提供詳細的物理技術(shù)不能確定的這些核苷酸和蛋白質(zhì)的序列信息；通過(guò)應用酶促消化，大的蛋白質(zhì)可以斷裂成可以測序的片段。在氨基酸和寡核苷酸磷骨架之間的鍵是MS-MS分析期間的結構弱點(diǎn)和可預測片段，質(zhì)譜的高精確度考慮了根據分子量數據的明確序列，當分子量數據提供一個(gè)以上可能性時(shí)，結合MS-MS分析。當對于已知或簡(jiǎn)單疫苗時(shí)，這個(gè)程序是相當簡(jiǎn)單的。

　　而當分析更復雜的疫苗時(shí)，如含有復雜佐劑或多種免疫原組分時(shí)，質(zhì)譜的分辨力具有很大的幫助，這些復雜混合物的HPLC-UV分析經(jīng)常產(chǎn)生洗脫合作的多種組分。由于這些類(lèi)型疫苗的各種各樣的成分，該質(zhì)譜儀通過(guò)它的質(zhì)譜敏感性和選擇性檢測器，提供了額外的分離，通過(guò)質(zhì)譜可以消除洗脫合作組分。這些技術(shù)已經(jīng)成功地被應用，例如測定復雜疫苗中的磷脂成分和描述蛋白質(zhì)特征。

　　疫苗重組，技術(shù)發(fā)展的全新挑戰

　　早年的疫苗往往以病原微生物或其代謝產(chǎn)物，經(jīng)過(guò)人工減毒、滅活之后產(chǎn)生的，但隨著(zhù)二十多年來(lái)遺傳學(xué)的飛速發(fā)展，疫苗重組（VaccinesRecombination），即利用遺產(chǎn)學(xué)重組機制研發(fā)生產(chǎn)全新疫苗，已經(jīng)成為了疫苗技術(shù)發(fā)展的最新趨勢之一。這一技術(shù)是通過(guò)DNA重組疫苗，或者消除、修飾病原微生物上已知的致病性基因，抑或是以非致病性微生物體為載體，插入病原微生物的某個(gè)基因等手段來(lái)開(kāi)發(fā)、生產(chǎn)疫苗。

　　這一全新的技術(shù)趨勢，給疫苗檢測方法的開(kāi)發(fā)帶來(lái)了更嚴峻的挑戰。作為生物制藥領(lǐng)域檢測技術(shù)領(lǐng)導者的沃特世，正與全球研究人員合作，開(kāi)發(fā)基于最新實(shí)驗室檢測技術(shù)的疫苗檢測方法，并且取得了不錯的成績(jì)。

　　例如在重組流感疫苗的研究中，經(jīng)批準的季節性流感滅活疫苗通常含有規定量的HAs—H1、H3和B的混合物，對應3種最常見(jiàn)的病毒流感A亞型的H1N1和H3N2和流感B的HA蛋白。這些HA蛋白是糖蛋白類(lèi)，每個(gè)糖基化位點(diǎn)均含有多種N-糖基化基序且每個(gè)位點(diǎn)含多種糖形。由于HAs在流感結合至宿主細胞，即感染過(guò)程中的重要決定作用，HAs中糖基化的精細鑒定和監測對疫苗的開(kāi)發(fā)和生產(chǎn)都非常重要。然而，傳統方法很難區分同一蛋白不同糖基化位點(diǎn)上的聚糖分子，因此用傳統方法表征含多個(gè)糖基化位點(diǎn)的糖蛋白（如HAs），是極富挑戰的。

　　沃特世利用其超高效液相色譜（UPLC?）革新的分離能力，經(jīng)由LC/UV-MS系統分析了單克隆鼠lgG1抗體胰蛋白酶消化所得胰蛋白酶肽的四種主要的N-糖型。結果顯示該方法可檢測并量化糖基化。且采用該方法可同時(shí)鑒定糖基化位點(diǎn)和聚糖分子。這一成果幫助疫苗研究者克服了傳統檢測手段能力不足帶來(lái)的困難。

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