腸道病毒所致各系統感染
腸道病毒所致各系統感染 的檢查:
糞便量 白細胞計數(WBC) 紅細胞葡萄糖-6-磷酸脫氫酶活性 凝血時(shí)間 血常規
(一)周?chē)?白細胞計數大多正常,在某些腸道病毒感染時(shí)可增高,中性粒細胞也可增多。
(二)病毒分離 一般都采取咽拭及糞便作病毒分離和檢定,尚可從病人的腦脊液、胸水、心包積液、血液、皰漿以及活檢或尸檢取得的組織中分離到病毒。標本取得后,應立即送檢。可接種于猴腎、人胚腎、人羊膜、人二倍體或Hela細胞、KB傳代細胞中進(jìn)行組織培養,觀(guān)察細胞病變。同時(shí)用多種組織培養細胞進(jìn)行分離可提高陽(yáng)性率。陽(yáng)性標本再以特異型的免疫血清作中和試驗進(jìn)行型別鑒定。疑有柯薩奇A組病毒感染者,應將標本經(jīng)皮下、腹腔內或腦內途徑接種乳鼠進(jìn)行病毒分離,因其組織培養陽(yáng)性率不高。柯薩奇B組病毒亦可使乳鼠致病。
(三)血清免疫學(xué)試驗 采取雙份血清,測定型特異抗體水平。一般可用中和試驗、補體結合試驗、酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA,酶標法)、放射免疫等法進(jìn)行測定,其中以中和試驗最為可靠,中和抗體消失最慢,型特異性也較強。如恢復期抗體水平比早期有≥4倍上升,則有極大的診斷意義。但因腸道病毒型別眾多,血清學(xué)中和試驗工作量大,只有當某地一已知型腸道病毒流行時(shí),以此法進(jìn)行診斷比較理想。
(四)免疫熒光快速診斷法 以熒光染色的免疫抗體來(lái)鑒定抗原可達到快速診斷的目的。但目前除在脊髓灰質(zhì)炎病毒感染時(shí)應用外,在腸道病毒感染時(shí)采用不多,因需備各種型特異的免疫血清,手續繁多。最近采用許多血清型共有的VP3-ZC抗原和一種與多血清型的VP1衣殼蛋白交叉反應的單克隆抗體,改進(jìn)了免疫診斷方法,但目前仍停留于研究階段。
(五)核酸雜交法 由于不同血清型的腸道病毒基因組間存在同源性,特別是5′端非編碼區部分區域高度保守,故可供核酸雜交,使近年來(lái)對腸道病毒鑒定有了新的飛躍。采用探針有以下三種:①cDNA探針,以病毒RNA某一片段為模板,由逆轉錄酶催化產(chǎn)生,大多克隆在質(zhì)粒載體中,再把帶有顯色基因(生物素或地高辛)或同位素的核苷酸摻入到新合成的cDNA鏈中去,加以標記,若將標本先經(jīng)12~24小時(shí)組織培養可提高陽(yáng)性率。②RNA探針-由于RNA是單鏈分子,故它與靶序列的雜交反應效率極高,一般用特異的轉錄載體克隆腸道病毒RNA探針,混合幾種RNA探針可使檢測病毒型更廣,RNA探針在特異性和敏感性方面都優(yōu)于cDNA探針。③寡核苷酸探針,較上述二種探針有下面優(yōu)點(diǎn)。因其鏈短,與等量靶位點(diǎn)完全雜交時(shí)間短,且可識別靶序列內一個(gè)堿基的變化,可檢測點(diǎn)突變,又可大量合成,價(jià)廉。此探針因選擇5′端非編碼區共同序列,故可牢固而特異地同大多數臨床常見(jiàn)腸道病毒結合。為了克服標本中腸道病毒滴度太低的問(wèn)題,近年采用PCR法將單一基因或短DNA序列放大,再與探針雜交,此法已應用于臨床。在腸道病毒中樞神經(jīng)系統感染流行時(shí),從腦脊液中檢測腸道病毒RNA,陽(yáng)性率高,可在24小時(shí)內得結果,比病毒培養平均需6~8天快得多。臨床標本用PCR擴增后,再與非同位素標記腸道病毒探針雜交,數小時(shí)即有結果,大大有助于臨床確診。
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