HBV分子病毒學(xué)研究中常用的幾種肝細胞（系）

2018-07-28 來(lái)源：中國病毒學(xué)論壇標簽：掌上醫生喝茶減肥一天瘦一斤安全減肥 cps聯(lián)盟美容護膚

摘要：最經(jīng)典的肝癌細胞系之一，大約30多年前分離自一位15歲美國白人男孩的肝癌組織，形態(tài)為上皮細胞，極性細胞；乙肝表面抗原陰性，對G418有抗性。

1.HepG2

最經(jīng)典的肝癌細胞系之一，大約30多年前分離自一位15歲美國白人男孩的肝癌組織，形態(tài)為上皮細胞，極性細胞；乙肝表面抗原陰性，對G418有抗性。由ATCC收錄。主要特點(diǎn)是可以大規模培養，對除ViralEntrystep之外的HBVlifecycle支持度好，是研究HBV基因表達/病毒復制的重要模型。缺點(diǎn)是培養時(shí)容易成團疊層成菌落狀，最好先用collagen處理培養瓶/皿。

2.Huh-7

1982年（也是大約30年前）分離自一位57歲日本男性的肝癌組織。上皮樣細胞，但為非極性細胞（2D培養下），乙肝表面抗原陰性。由JCRBCellBank收錄。優(yōu)點(diǎn)類(lèi)似HepG2細胞，相比更易于培養，且轉染效率更高，瞬時(shí)轉染HBV表達質(zhì)粒后上清中可收獲10^6-10^7copies/ml的病毒顆粒。缺點(diǎn)是該細胞未被ATCC收錄，市面上存在不少亞克隆，來(lái)源不單一，導致不同實(shí)驗室的來(lái)源不同的Huh-7細胞株上的結果很可能無(wú)法直接比較。

3.HepG22.2.15

1987年由西奈山醫學(xué)院的研究人員構建（作者之一是中國人Mei-LingCHEN）。通過(guò)轉染將兩對“頭尾相接”的HBV基因組dimer整合入HepG2細胞基因組。該細胞系在分化培養條件下可以產(chǎn)生高滴度的HBV感染性顆粒（~10^8copies/ml）,同時(shí)核內可檢測到cccDNA的存在（盡管含量很低），一直是抗HBV藥物篩選的重要細胞模型。缺點(diǎn)是該細胞系太過(guò)古老且缺乏原始種子庫，導致在連續培養快三十年后，其細胞生物學(xué)特性和祖細胞HepG2差異很大，缺乏合適的對照，無(wú)法作為功能基因研究的合適模型了。

考慮到這一問(wèn)題，美國和德國的相關(guān)研究人員基于HepG2又各自建立了另外兩種新細胞系：HepAD38和HepG2H1.3。前者包含1.1拷貝的整合HBV基因組，其表達由誘導型CMV-tet啟動(dòng)子調控，病毒產(chǎn)量甚至高于HepG22.2.15，分化培養所需時(shí)間也較短。后者包含1.3拷貝的整合HBV基因組，使用HBV自身的啟動(dòng)子，相對比較接近體外感染過(guò)程中/后的HBV-CellInteraction，適合用于HBV相關(guān)功能基因（組）的研究。

4.PHH（primaryhumanhepatocytes）

人原代肝細胞體外分離培養技術(shù)，由德國科學(xué)家于2003年建立。作為原代細胞，自然有著(zhù)任何腫瘤細胞系所無(wú)法匹敵的優(yōu)點(diǎn)，能夠被HBV直接感染，接近自然感染過(guò)程中生理學(xué)生物學(xué)指標，是目前最為可靠的體外感染模型。利用灌流技術(shù)從手術(shù)切除的患者正常肝組織中分離PHH，目前技術(shù)上已經(jīng)相當成熟，但操作上仍比較復雜，對肝源質(zhì)量和培養條件要求苛刻，細胞本身無(wú)法傳代，生命周期有限，尤其考慮其細胞來(lái)源的特殊性，顯然是無(wú)法規模化推廣的，僅限于少數實(shí)驗室的“奢侈品”。

5.HepaRG

由法國科學(xué)家于2002年建立，是一種具有定向分化潛力的肝臟祖細胞，在體外分化培養條件下可以定向分化為具有肝細胞和膽管細胞功能及特征的細胞。分化后的HepaRG細胞在形態(tài)和功能上和PHH非常接近，是目前唯一可以被HBV體外感染的非腫瘤細胞系，具備包含Viralentrystep在內的完整HBVlifecycle，應該說(shuō)是HBV病毒學(xué)研究及新藥篩選的最佳工具。

HepaRG細胞的主要缺點(diǎn)是，對培養條件要求非常嚴格，且細胞需要連續培養并分化大約4周，之后如果一切無(wú)誤方能用于HBV感染實(shí)驗。此外，即便是有經(jīng)驗的研究人員提供了最理想的培養條件，HBV在HepaRG上的感染效率也只有大約10-15%（即便是PHH也同樣如此），復制水平遠沒(méi)有基于質(zhì)粒轉染來(lái)的高，這也正是目前體外感染實(shí)驗的瓶頸所在。另有研究表明，HepaRG感染HBV之后的cccDNA水平較低，未能檢測到顯著(zhù)的rcDNA-cccDNArecycling，其原因還有待進(jìn)一步的探索。

6.L02

非腫瘤的正常人肝細胞株（也有資料說(shuō)是人胚胎肝細胞株，不能確定）。很可惜從來(lái)沒(méi)有用過(guò)這個(gè)細胞株，也未能查到該細胞具體的來(lái)源信息，希望有知情的朋友可以幫忙補充。目前國外使用L02細胞用于HBV相關(guān)研究的報道還不多見(jiàn)，主要還是來(lái)自國內的研究團隊。作為一種區別于HepG2/HuH-7等腫瘤細胞的正常肝細胞株，在某些特定的研究背景下，L02會(huì )有其獨特的優(yōu)勢。如何被國際同行所認可，可能是該細胞被廣泛運用的前提。

7.HepG2-NTCP/HuH7-NTCP

由北京生命科學(xué)研究所成功鑒定出了HBV功能性受體NTCP。此項研究的核心成果及應用之一，就是過(guò)表達NTCP的HepG2/HuH7細胞，可以成功被HBV感染（效率類(lèi)似PHH/HepRG細胞）！簡(jiǎn)單方便，任何實(shí)驗室都可以很容易的重復，相信類(lèi)似的細胞系會(huì )得到非常廣泛的運用。