β-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶概述
β-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶(NAG)可水解β-N-乙酰氨基葡萄糖苷,也能水解β-N-乙酰氨基半乳糖苷。該酶廣泛存在于各種組織器官、體液、血細胞中,是溶酶體中的一種酸性水解酶。其測定方法有比色法和熒光光度法。
β-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶正常值
1、對硝基酚比色法:血清NAG21.54±6.4U/L,尿液NAG呈正態(tài)分布,中位數為9.13U/g肌酐,第95百分位數上限為16.10U/g肌酐。
2、熒光光度法:
成人血清:9.94±2.O7U/L。
成人尿液:6.39±3.19U/LCre。
β-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶臨床意義
血、尿NAG活性測定對反映腎實(shí)質(zhì)病變,尤其是急性損傷和活動(dòng)期病變更敏感,主要用于早期腎損傷的監測和病情觀(guān)察。
1、腎小管疾病重金屬(汞、鉛、鎘等)及藥物性腎損傷、缺血、缺氧、失血、休克等均可引起NAG活性增加。
2、腎病綜合征尿NAG常明顯增加,緩解期下降,復發(fā)時(shí)迅速回升,故可作為臨床觀(guān)察指征。腎小球腎炎急性期變化較大,但與腎小管損傷相比,變化幅度較小。
3、尿路感染的定位診斷急、慢性腎盂腎炎尿NAG上升,能與單純性膀胱炎區別。可用于早期上尿路感染的診斷。
4、腎移植排斥反應的監測腎移植排斥反應早期NAG即可升高,比尿蛋白、血肌酐、肌酐清除率更敏感。
5、糖尿病腎痛早期診斷糖尿病腎病尿NAG升高,用于此病的早期診斷優(yōu)于尿白蛋白及β2-微球蛋白。
結果偏高可能疾病:腎病綜合征、尿路感染。
β-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶檢查方法
(1)對硝基酚比色法混合,在405nm波長(cháng),1cm光徑,蒸餾水調零,讀取各管吸光度,用(AU-AC)之差查標準曲線(xiàn)。
(2)熒光光度法:先將血清或尿用不含牛血清白蛋白(BSA)的緩沖液作20倍稀釋?zhuān)靹颍ぐl(fā)波長(cháng)364nm,發(fā)射波長(cháng)448nm,以終止液調零,6μmol/L 4-MU管調熒光強度至100后,分別測空白管及測定管的熒光強度。
β-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶注意事項
(1)對硝基酚比色法:
①基質(zhì)對硝基酚應純化,配制前置50℃烘24h。用10mmol/L NaOH配成0.04mmol/L濃度,用窄帶寬分光光度計掃描吸收曲線(xiàn),λmax=401nm,根據IFCC標準,Aλmax=0.7316~0.7388,Eλmax=18380±90(25℃)。
②底物溶解度小,配制時(shí)應先用適量pH 4.6緩沖液調成糊狀,再逐漸加緩沖液至所需量。
③測定結果超線(xiàn)性范圍時(shí),應將標本用生理鹽水稀釋后重測,結果乘以稀釋倍數。
④尿酶濃度受尿量影響較大,應留取24h尿量。若以NAG/g肌酐比值計算酶排出率,即不受尿濃縮或稀釋的影響,又不需留24h尿。
(2)熒光光度法:
①熒光法測NAG已有國產(chǎn)試劑盒,其敏感度高,不受尿色干擾。
②也可用上海第三分析儀器廠(chǎng)產(chǎn)930熒光光度計,激發(fā)濾光片360,發(fā)射濾光片用(400+450)復合,效果滿(mǎn)意。
③此法酶反應液中各成分濃度為:底物1.33mmol/L,枸櫞酸20mmol/L,Na2HPO432mmol/L。
④配試劑所用溶劑應用重蒸餾水,底物應無(wú)游離4-MU,BSA中應無(wú)該酶或用50℃加熱2h滅活。
⑤血清中NAG于4℃穩定數小時(shí)至數天,-20℃可穩定數月。尿標本4℃穩定1周,也可用枸櫞酸鹽抗凝血漿。
⑥β-N-乙酰氨基葡萄糖苷可被二種酶催化水解,一種是β-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶(EC 3.2.1.30),另一種是β-N-乙酰已糖苷酶(EC 3.2.1.52),只有對提純的酶才能限定EC 3.2.1.30或EC 3.2.1.52。如今國內文獻中常稱(chēng)的NAG,嚴格地說(shuō)是按所用底物命名的,而不是指酶對底物的特異性。所以如今國外文獻常泛稱(chēng)β-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶。