載脂蛋白CⅠ概述
載脂蛋白C是極低密度脂蛋白膽固醇的主要載脂蛋白,也存在于高密度脂蛋白-膽固醇和低密度脂蛋白-膽固醇中,有3種不同的載脂蛋白C,即ApoCⅠ、ApoCⅡ、ApoCⅢ,它是CM、VLDL他和HDL的少量結構蛋白。
載脂蛋白CⅠ正常值
酶免疫測定法:37~99mg/L。
載脂蛋白CⅠ臨床意義
活化脂蛋白酯酶和卵磷脂膽固醇酯酰轉移酶的作用,測其含量對闡明脂蛋白C的功能、脂蛋白代謝及高脂血癥、心血管疾病的原因有重要意義。
載脂蛋白CⅠ檢查方法
載脂蛋白CⅠ注意事項
(1)免疫透射比濁法:
①關(guān)于抗血清:比濁測定與其他方法相比對抗血清的要求更高。比濁法以用多克隆抗體為宜。抗血清中必須不含雜抗體。必須十分重視從人血清中提取的apoA-Ⅰ達到免疫純、色譜純與電泳純,這不是一般實(shí)驗室都能做到的。抗血清效價(jià)(滴度)不可低于16。目前國內某些商品試劑中,apoA-Ⅰ抗血清效價(jià)極低,選購試劑盒時(shí)必須注意。如果沒(méi)有在選購前鑒定抗血清質(zhì)量的經(jīng)驗,應請有條件的單位鑒定之。
②上法中標本(血清)稀釋200倍是為了便于手工操作(加樣100μl),如有精密加樣器,可作20倍稀釋(用10μl)。為了適合不同實(shí)驗室的條件(如不同類(lèi)型的自動(dòng)化儀器),作適當修改時(shí)應注意抗原抗體的比例,必須十分注意反應體系中不可有抗原過(guò)量,線(xiàn)性上限不可低于2.5g/L。換言之,抗血清用量必須充裕,否則標本中apoA-Ⅰ高水平時(shí)測出結果偏低。目前國內某些商品試劑盒不但抗血清效價(jià)過(guò)低,操作中所定標本用量又過(guò)大(如3~5μl),抗體明顯不足,測出結果必然不準確。
③為了達到準確測定的目的,apoA-Ⅰ與B比濁測定(終點(diǎn)法)中必須作校準曲線(xiàn)計算結果。一定范圍(低標本用量)濃度(X)與濁度(Y)基本上成直線(xiàn)關(guān)系,直線(xiàn)回歸計算出在Y軸上有一定截距(A值<0.1),所以用單點(diǎn)校準計算結果偏差較大,使測出結果不能準確反映濃度的高低(高的偏低,低的偏高)。千萬(wàn)不要因為單點(diǎn)法簡(jiǎn)便而忽略了測定的準確性。無(wú)論用何種自動(dòng)化儀器,必須先試作校準曲線(xiàn)。如果在所用儀器及特定條件下反復測試,回歸線(xiàn)的截距不明顯時(shí),才能采用單點(diǎn)校準法。標本用量在3~5μl時(shí),即使加大抗血清用量,濃度與濁度也不成直線(xiàn)關(guān)系,只能用曲線(xiàn)直線(xiàn)化轉換后計算。
④主要干擾因素是血清本身的混濁(如高脂血清),用超離心或脂肪酶水解等標本預處理方法都不實(shí)用。用表面活性劑消濁的作用也有限,所以在測定中必須作標本空白管。除了自動(dòng)分析中可采用兩點(diǎn)法外,手工法用單一試劑而不扣除標本空白的做法是錯誤的。為了減少基質(zhì)效應對濁度反應的影響,必須用定值血清作校準物。此外,塵埃粒子、比濁皿劃痕等干擾也必須排除。
⑤有的商品試劑盒(包括某些進(jìn)口產(chǎn)品)所附校準血清定值不準確,是誤差的重要來(lái)源。
(2)火箭電泳法:
①抗原稀釋倍數與抗血清用量的選擇,應以火箭峰清晰、校準曲線(xiàn)斜率適中并成直線(xiàn)為宜。本法同時(shí)測定apoA-Ⅰ與apoB,應調整兩種抗血清用量,使二者峰高有區別,apoB峰高不小于1cm。
②不同種類(lèi)來(lái)源的抗血清(如兔與羊),在等效價(jià)的情況下進(jìn)行試驗,結果會(huì )有差異。apoA-Ⅰ測定以兔抗血清為好。用兔血清時(shí)峰形尖細,而羊血清所產(chǎn)生的峰粗,峰尖圓鈍,有時(shí)在峰頂前出現虛影。校準血清所作校準曲線(xiàn)斜率也不同。但不論用何種抗血清,定量結果差別不大。
③在一定條件下電泳,不同稀釋度校準血清的峰高不會(huì )有明顯變動(dòng),校準曲線(xiàn)斜率基本一致。如標本峰高超出校準曲線(xiàn)范圍時(shí),應調整標本稀釋倍數后重測。板間CV通常小于5%。
④火箭電泳結果可以用染色法或直接肉眼觀(guān)察可見(jiàn)的火箭峰。前者用標本少,節省抗血清,但如適當增加標本及抗血清用量,不染色更為方便。所用瓊脂糖應為標準電滲或低電滲的,凝膠中加入適量葡聚糖或聚乙二醇可使火箭峰更清晰。
⑤火箭峰的測量可以計算面積或峰高,面積是峰高乘以峰寬(峰半高處的寬度)。測量精度最好能達0.1mm。須用機械或電子放大設備。標準曲線(xiàn)范圍內峰高以1~4cm為宜。
⑥本法適用于少量標本分析。也適用于apoAⅡ、CⅠ、CⅡ、CⅢ、D、E及Lp(a)測定。