聚合酶鏈式反應概述
聚合酶鏈式反應(Polymerase Chain Reaction),簡(jiǎn)稱(chēng)PCR,是一種分子生物學(xué)技術(shù),用于放大特定的DNA片段。可看作生物體外的特殊DNA復制。
聚合酶鏈式反應正常值
聚合酶鏈式反應臨床意義
用于治療感染性疾病,腫瘤及遺傳病
感染性疾病
PCR在醫學(xué)檢驗學(xué)中最有價(jià)值的應用領(lǐng)域就是對感染性疾病的診斷。理論上,只要樣本有一個(gè)病原體存在,PCR就可以檢測到。一般實(shí)驗室也能檢出10~100基因拷貝,而目前病原體抗原檢測方法一般需要105-7個(gè)病原體才可檢測到。PCR對病原體的檢測解決了免疫學(xué)檢測的“窗口期”問(wèn)題,可判斷疾病是否處于隱性或亞臨床狀態(tài)。
定量PCR研究資料已表明,病原體數量與感染性疾病病情的輕重程度、傳染性及治療效果均有相關(guān)性。許多研究表明,人類(lèi)免疫缺陷病毒(HIV)感染后,潛伏期長(cháng)短和臨床癥狀輕重與血液中的病毒量顯著(zhù)相關(guān);也有研究表明,HIV病毒載量低于一定值時(shí),沒(méi)有傳染性。
在乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒定量研究中發(fā)現,病毒的數量與某些藥物的療效相關(guān)。例如,干擾素治療對肝炎病毒高拷貝者不敏感,低拷貝者敏感;而有些藥物則具有顯著(zhù)降低病毒高拷貝的作用。
腫瘤
癌基因的表達增加和突變,在許多腫瘤早期和良性的階段就可出現。PCR技術(shù)不但能有效的檢測基因的突變,而且能準確檢測癌基因的表達量,可據此進(jìn)行腫瘤早期診斷、分型、分期和預后判斷。
幾乎所有慢性骨髓性白血病患者都可檢測到原癌基因易位導致的BCR/ABL融合基因形成,定量PCR技術(shù)可通過(guò)檢測BCR/ABL融合基因的表達確定微量殘余惡性細胞存在的數量,以此作為治療效果和估計復發(fā)的危險性的依據。
一些病毒致癌作用也與病毒載量有關(guān),EB病毒載量的FQ-PCR檢測結果已被用于鼻咽癌早期發(fā)現和隨訪(fǎng)。
遺傳病
PCR技術(shù)首次臨床應用就是從檢測鐮狀細胞和β-地中海貧血的基因突變開(kāi)始的。基因的突變和缺失均會(huì )引起各種珠蛋白的表達不平衡,用FQ-PCR檢測各種珠蛋白基因表達差異,是地中海貧血診斷的有效手段。
聚合酶鏈式反應檢查方法
1.備齊用物,標本容器上貼好標簽,核對無(wú)誤后向患者解釋以取得合作。露出患者手臂,選擇靜脈,于靜脈穿刺部位上方約4~6cm處扎緊止血帶,并囑患者握緊拳頭,使靜脈充盈顯露。
2.常規消毒皮膚,待干。
3.在穿刺部位下方,以左手拇指拉緊皮膚并固定靜脈,右手持注射器,針頭斜面向上與皮膚成15度~30度,在靜脈上或旁側刺入皮下,再沿靜脈走向潛行刺入靜脈,見(jiàn)回血后將針頭略放平,稍前行固定不動(dòng),抽血至需要量時(shí),放松止血帶,囑患者松拳,干棉簽按壓穿刺點(diǎn),迅速拔出針頭,并將4.卸下針頭,將血液沿管壁緩緩注入容器內,切勿將泡沫注入,以免溶血。容器內放有玻璃珠時(shí)應迅速搖動(dòng),以除去纖維蛋白原;如系抗凝試管,應在雙手內旋轉搓動(dòng),以防凝固;如系干燥試管,不應搖動(dòng);如系液體培養基,應使血液與培養液混勻,并在血液注入培養瓶前后,用火焰消毒瓶口,注意勿使瓶塞接觸血液。
5.送實(shí)驗室檢查。
聚合酶鏈式反應注意事項
檢查前準備:
1.抽血前一天不吃過(guò)于油膩、高蛋白食物,避免大量飲酒。血液中的酒精成分會(huì )直接影響檢驗結果。
2.體檢前一天 的晚八時(shí)以后,應禁食,以免影響第二天空腹血糖等指標的檢測。
3.抽血時(shí) 應放松心情,避免因恐懼造成血管的收縮、增加采血的困難。
有暈針史的病人請提前說(shuō)明,我們將做特別安排。
檢查時(shí)要求:
1.抽血后,需在針孔處進(jìn)行局部按壓3-5分鐘,進(jìn)行止血。注意:不要揉,以免造成皮下血腫。
2.按壓時(shí)間應充分。 各人的凝血時(shí)間有差異,有的人需要稍長(cháng)的時(shí)間方可凝血。所以當皮膚表層看似未出血就馬上停止壓迫,可能會(huì )因未完全止血,而使血液滲至皮下造成青淤。因此按壓時(shí)間長(cháng)些,才能完全止血。如有出血傾向,更應延長(cháng)按壓時(shí)間。
3.抽血后出現暈針癥狀如:頭暈、眼花、乏力等應立即平臥、飲少量糖水,待癥狀緩解后再進(jìn)行體檢。
4.若局部出現淤血,24小時(shí)后用溫熱毛巾濕敷,可促進(jìn)吸收。
不適宜人群:
沒(méi)有不適宜人群。