幽門(mén)螺旋桿菌的免疫學(xué)檢測概述

幽門(mén)螺桿菌免疫學(xué)檢查是通過(guò)測定血清中的幽門(mén)螺旋桿菌抗體來(lái)檢測幽門(mén)螺旋桿菌感染，包括補被動(dòng)血凝測定、免疫印跡技術(shù)和酶聯(lián)合吸附測定(ELISA)等。 

• 檢查部位 腹部
• 科室 內科
• 相關(guān)疾病 消化系統潰瘍病 幽門(mén)螺桿菌感染 胃反應性淋巴增生 小兒幽門(mén)螺桿菌感染 胃潰瘍 復發(fā)性阿弗他潰瘍
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• 相關(guān)癥狀 腹痛 食欲減退 消化性潰瘍 胃痛

幽門(mén)螺旋桿菌的免疫學(xué)檢測正常值

• 結果為陰性。 

幽門(mén)螺旋桿菌的免疫學(xué)檢測臨床意義

• 異常結果：　(1) 被檢血清凝集滴度低于抗原對照4倍兩孔或4倍以上為陽(yáng)性。恢復期血清抗原滴度比急性期高4倍或4倍以上判為陽(yáng)性。　(2) 有特殊顯色反應，證明有某種蛋白質(zhì)存在。　(3) 待檢血清與已知陰性血清的比值(P/N)≥2.1，而且待檢血清的OD值≥0.4，則判為陽(yáng)性。　需要檢查人群：消化道潰瘍患者。 

幽門(mén)螺旋桿菌的免疫學(xué)檢測檢查方法

• 一、被動(dòng)血凝測定
  患者刺取腦脊液，采用稀釋抗原固定血清法用96孔V型微量血凝板，將乙腦抗原作倍比稀釋?zhuān)姑靠缀?5uL, 被檢血清用稀釋液作1：10稀釋?zhuān)靠准尤?5uL，再滴加凍干乙腦單克隆抗體致敏羊血紅細胞25uL，37℃下放置數小時(shí)后觀(guān)察結果。
  二、免疫印跡技術(shù)
  （一）蛋白質(zhì)樣品獲得：細菌誘導表達后，可通過(guò)電泳上樣緩沖液直接裂解細胞，真核細胞加勻漿緩沖液，機械或超聲波室溫勻漿0.5-1min。然后4℃，13,000g離心15min。取上清液作為樣品。
  （二）電泳：制備電泳凝膠，進(jìn)行SDS-PAGE。
  （三）轉移：（半干式轉移）
  1、電泳結束后將膠條割至合適大小，用轉膜緩沖液平衡，5min×3次。
  2、膜處理：預先裁好與膠條同樣大小的濾紙和NC膜，浸入轉膜緩沖液中10min。
  3、轉膜：轉膜裝置從下至上依次按陽(yáng)極碳板、24層濾紙、NC膜、凝膠、24層濾紙、陰極碳板的順序放好，濾紙、凝膠、NC膜精確對齊，每一步去除氣泡，上壓500g重物，將碳板上多余的液體吸干。接通電源，恒流1mA/cm2，轉移1.5hr。轉移結束后，斷開(kāi)電源將膜取出，割取待測膜條做免疫印跡。將有蛋白標準的條帶染色，放入膜染色液中50s后，在50%甲醇中多次脫色，至背景清晰，然后用雙蒸水洗，風(fēng)干夾于兩層濾紙中保存，留與顯色結果作對比。
  （四）免疫反應：
  1、用0.01M PBS洗膜，5min ×3次。
  2、加入包被液，平穩搖動(dòng)，室溫2hr。
  3、棄包被液，用0.01M PBS洗膜，5min×3次。
  4、加入一抗（按合適稀釋比例用0.01M PBS稀釋?zhuān)后w必須覆蓋膜的全部），4℃ 放置12hr以上。陰性對照，以1%BSA取代一抗，其余步驟與實(shí)驗組相同。
  5、棄一抗和1%BSA，用0.01M PBS分別洗膜，5min×4次。
  6、加入辣根過(guò)氧化物酶偶聯(lián)的二抗（按合適稀釋比例用0.01M PBS稀釋?zhuān)椒€搖動(dòng)，室溫2hr。
  7、棄二抗，用0.01M PBS洗膜，5min×4次。
  8、加入顯色液，避光顯色至出現條帶時(shí)放入雙蒸水中終止反應。
  三、酶聯(lián)合吸附測定
  常用的 ELISA 法有雙抗體夾心法和間接法，前者用于檢測大分子抗原，后者用于測定特異抗體。
  1.間接ELISA
  本法主要用于檢測抗體。間接ELISA的操作程序如下。
  （1） 材料
  ① 包被液、洗滌液、保溫液、底物液、終止液；
  ② DVH包被抗原、酶標抗抗體、陰性及陽(yáng)性DVH參考血清；
  ③ ELISA檢測儀、加樣器、聚苯乙烯微量板。
  （2） 方法步驟
  ① 加抗原包被 → 4℃過(guò)夜，洗滌三次、拋干；
  ② 加待檢血清 → 37℃ 2小時(shí)，洗滌三次、拋干；
  ③ 加酶標抗體 → 37℃ 2小時(shí)，洗滌三次、拋干；
  ④ 加底物液　→ 37℃ 30分鐘，加終止液；
  ⑤ 用ELISA檢測儀測定OD值，并計算出P/N比值。
  2.雙抗體夾心ELISA
  本法主要用于檢測大分子抗原。
  ① 加抗體包被 → 4℃過(guò)夜，洗滌三次、拋干；
  ② 加待檢抗原 → 37℃ 30分鐘，洗滌三次、拋干；
  ③ 加酶標抗體 → 37℃ 30分鐘，洗滌三次、拋干；
  ④ 加底物液　→ 37℃ 15分鐘，加終止液；
  ⑤ 用ELISA檢測儀測定OD值。 

幽門(mén)螺旋桿菌的免疫學(xué)檢測注意事項

• 不適宜檢查人群：無(wú)。　檢查前禁忌：注意保護好腦部;準備好各種包裝液，并配置好濃度。　檢查時(shí)禁忌：　(1) 患者取腦脊液坐好，以免弄傷頭部。　(2) 所用單克隆抗體致敏羊血紅細胞要凍干才使用。　(3) 一抗、二抗的稀釋度、作用時(shí)間和溫度對不同的蛋白要經(jīng)過(guò)預實(shí)驗確定最佳條件。　(4) 顯色液必須新鮮配置使用，最后加入H2O2。　(5) DAB有致癌的潛在可能，操作時(shí)要小心仔細。　(6) 嚴格控制影響標記效率的因素如溫度、時(shí)間、pH、酶和抗體量等。　(7) 裝層析柱時(shí)要使柱體均勻、柱面平整，無(wú)氣泡、裂隙。