蛋白質(zhì)濃度測定概述
蛋白質(zhì)濃度測定是利用化學(xué)或物理方法測定蛋白質(zhì)的濃度,是往往用于計算純化方法的回收率的重要方法。 雙縮脲法 雙縮脲法是第一個(gè)用比色法測定蛋白質(zhì)濃度的方法,硫銨不干擾顯色, Cu2+與蛋白質(zhì)的肽鍵,以及酪氨酸殘基絡(luò )合,形成紫藍色絡(luò )合物,此物在540nm波長(cháng)處有最大吸收。雙縮脲法常用于0.5g/L~10g/L含量的蛋白質(zhì)溶液測定。
蛋白質(zhì)濃度測定正常值
人體正常值一般是60一80g/L。
蛋白質(zhì)濃度測定臨床意義
異常結果
1、 雙縮脲法:雙縮脲法是第一個(gè)用比色法測定蛋白質(zhì)濃度的方法,硫銨不干擾顯色, Cu2+與蛋白質(zhì)的肽鍵,以及酪氨酸殘基絡(luò )合,形成紫藍色絡(luò )合物,此物在540nm波長(cháng)處有最大吸收。雙縮脲法常用于0.5g/L~10g/L含量的蛋白質(zhì)溶液測定。
2、Lowry法:Cu+與蛋白質(zhì)在堿性溶液中形成絡(luò )合物,然后這個(gè)絡(luò )合物還原磷鉬磷-磷鎢酸試劑(福林-酚試劑),結果得到深藍色物。此法比雙縮脲法靈敏得多,適合于測定20mg/L~400mg/L含量的蛋白質(zhì)溶液。
3、紫外吸收法:大多數蛋白質(zhì)在280nm波長(cháng)處有特征的最大吸收,這是由于蛋白質(zhì)中有酪氨酸,色氨酸和苯丙氨酸存在,可用于測定0.1~0.5mg/ml含量的蛋白質(zhì)溶液。
需要檢查的人群
有軟弱無(wú)力疲乏、困倦,皮膚、黏膜蒼白,注意力不集中的人群。
蛋白質(zhì)濃度測定檢查方法
受試者靜脈采血,及時(shí)分離血清后測定。繪制標準曲線(xiàn):取96孔酶標板,加入試劑。試劑加完后,準確吸取20μl樣品溶液于酶標孔中,加入BCA試劑200μl,輕搖,于37℃保溫30-60min,冷卻至室溫后,以空白為對照,在酶標儀上590nm處比色,以牛血清白蛋白含量為橫坐標,以吸光值為縱坐標,繪制標準曲線(xiàn)。以標準曲線(xiàn)空白為對照,根據樣品的吸光值從標準曲線(xiàn)上查出樣品的蛋白質(zhì)含量。
蛋白質(zhì)濃度測定注意事項
檢查前禁忌:檢查前一天不吃過(guò)于油膩、高蛋白食物,避免大量飲酒。血液中的酒精成分會(huì )直接影響檢驗結果。體檢前一天的晚八時(shí)以后,應禁食。
檢查時(shí)要求:抽血時(shí)應放松心情,避免因恐懼造成血管的收縮、增加采血的困難。測定中,蛋白-染料復合物會(huì )有少部分吸附于比色杯壁上,實(shí)驗證明此復合物的吸附量是可以忽略的。測定完后可用乙醇將藍色的比色杯洗干凈。