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血清脂蛋白和血清脂蛋白電泳

血清脂蛋白和血清脂蛋白電泳概述

脂蛋白電泳主要用于高脂蛋白血癥分型,也有助于了解冠心病的血脂狀態(tài),更好地指導臨床診療工作。

  • 檢查部位 其他
  • 科室 內科
  • 相關(guān)疾病 高脂蛋白血癥
  • 相關(guān)癥狀

血清脂蛋白和血清脂蛋白電泳正常值

  • 醋酸纖維薄膜電泳法
    乳糜微粒0g/L(0mg/dl);
    極低密度脂蛋白0.06~0.3g/L(6~30mg/dl);
    低密度脂蛋白<7g/L(<700mg/dl);
    高密度脂蛋白:
    男0.52±0.11g/L(43±18mg/dl);
    女0.55±0.13g/L(47±2mg/dl)。

血清脂蛋白和血清脂蛋白電泳臨床意義

  • 1、增高:見(jiàn)于原發(fā)性高脂血癥。
    2、降低:見(jiàn)于低脂蛋白血癥。

血清脂蛋白和血清脂蛋白電泳檢查方法

  • 靜脈采血后立即送檢,檢測操作:
    1、將緩沖液加入電泳槽內,調節兩側槽內的緩沖液,使其處于同一平面。
    2、醋酸纖維素薄膜的準備:取醋酸纖維素薄膜(2cm×8cm)在毛面的一端(負極側)1.5cm處用鉛筆輕劃一橫線(xiàn),做點(diǎn)樣標記。編號,并標明正、負極后,將薄膜置于巴比妥-巴比妥鈉緩沖液中浸泡,待充分浸透后(一般為20min)取出,夾于潔凈濾紙中間吸去多余的緩沖液。
    3、將醋酸纖維素薄膜毛面向上貼于電泳槽支架上拉直。用微量吸管吸取無(wú)溶血血清3~5μl于橫線(xiàn)處沿橫線(xiàn)加樣,樣品應與薄膜的邊緣保持一定的距離,以免電泳圖譜中的蛋白區帶變形,待血清滲入薄膜后,反轉薄膜,使光面朝上,平直地貼于電泳槽支架上,用雙層濾紙或四層紗布將薄膜的兩端與緩沖液連通,稍待片刻。
    4、接通電源,注意醋酸纖維素薄膜上的正、負極,切勿接錯。電壓90~150V,電流0.4~0.6mA/cm(不同的電泳儀所需電壓,電流可能不同,應靈活掌握),夏季通電45min,冬季通電時(shí)間稍長(cháng),約為60min,電泳區帶展開(kāi)約25~35mm即可。
    5、染色:通電完畢,取下薄膜直接浸于麗春紅S染液或氨基黑10B染色液中,染色5~10min(以白蛋白區帶染透為止),然后在漂洗液中漂去剩余染料,直至背景無(wú)色為止。
    6、定量:
    ① 比色法:將漂洗的薄膜吸干,剪下各染色的蛋白區帶入相應的試管中,在白蛋白管中加0.4mol/L氫氧化鈉6ml(計算時(shí)吸光度乘以2),其余各管加 3ml,振搖數次,置37℃水箱20min使其色澤浸出。氨基黑10B染色用分光光度計在620nm處讀取各管吸光度,然后計算出各管的含量(同時(shí)做空白管對照)。
    麗春紅S染色時(shí)浸出液用0.1mol/L氫氧化鈉,加入量同上法。10min后,白蛋白管內加400ml/L醋酸 0.6ml(計算吸光度時(shí)乘以2),其余各管加0.3ml,以中和部分氫氧化鈉,使色澤加深,必要時(shí)離心,取上清液用分光光度計在520nm處讀取各管的吸光度(同時(shí)作空白對照),然后計算各自的含量。
    ②光密度計掃描法:A.透明:吸去薄膜上的漂洗液(為防止透明液被稀釋影響透明結果),將薄膜浸入透明液中2~3min,然后取出,以滾動(dòng)的方式平貼于潔凈無(wú)劃痕的載物玻璃片上(切勿產(chǎn)生氣泡),將此玻片豎立片刻,除去多余透明液后,置于恒溫 90~100℃的烘箱內,烘烤10~15min,取出冷卻至室溫,用此法透明的各蛋白區帶鮮明,薄膜平整,可供直接掃描和永久保存(用氫萘或液體石蠟透明,應將漂洗過(guò)的薄膜烘干后進(jìn)行透明,此法透明的薄膜不能存久,且易發(fā)生皺折)。②掃描定量:將已透明的薄膜放入全自動(dòng)光密度計或其他光密度計暗箱內,進(jìn)行掃描分析。 

血清脂蛋白和血清脂蛋白電泳注意事項

  • 1、樣本:可用新鮮、未冷凍的血清分離脂蛋白。血漿不適合用來(lái)做脂蛋白電泳,因為會(huì )出現一條纖維蛋白原區帶。
    2、帶有清晰的分離組分的脂蛋白圖形是進(jìn)行準確解釋的先決條件。如果能夠很好地滿(mǎn)足這些條件,在脂蛋白電泳和參考方法(超速離心法)之間就可以相當一致。各組分的精密度不同,用變異系數表示,估計一般都在5%以下。
    3、偶爾α-脂蛋白會(huì )消失和(或)出現一條舌狀的窄的α-脂蛋白區帶。這是因為游離脂肪酸在。α-脂蛋白上積聚,造成了這些微粒帶有電荷相等。由于α-區帶密度增大,從而導致結果偏高。和沉淀技術(shù)相比,定量脂蛋白電泳的耗資較高。 

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